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人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书

发表时间:2024-05-06

人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

 

本试剂盒仅供研究使用。

 

96T

 

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中类嗜 T 淋巴细胞病毒(HTLV)表达。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人类嗜 T 淋巴细胞病毒(HTLV)表达。用纯化的人类 嗜 T 淋巴细胞病毒(HTLV)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中类嗜 T 淋巴细胞病 毒(HTLV)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的类嗜 T 淋巴细胞 病毒(HTLV)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm  波长下测定吸光度(OD 值),与 CUTOFF 值相比较,从而判定标本中人类嗜 T 淋巴细胞病 毒(HTLV)的存在与否。

试剂盒组成

 

1

30 倍浓缩洗涤液

20ml×1 

7

终止液

6ml×1 

2

酶标试剂

6ml×1 

8

阳性对照

0.5ml×1

3

酶标包被板

12 ×8 

9

阴性对照

0.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1 

10

说明书

1 

5

显色剂 A 

6ml×1 

11

封板膜

2 

6

显色剂 B 

6ml×1/

12

密封袋

1 

标本要求

1 .标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1.     编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照 1 孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

2.     加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl 。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl ,然后再加待测样品 10μl 。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不 触及孔壁,轻轻晃动混匀,

3.     温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.     配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.     洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。

6.     加酶:每孔加入酶标试剂 50μl ,空白孔除外。

7.     温育:操作同 3。

8.     洗涤:操作同 5。


9.     显色:每孔先加入显色剂 A50μl ,再加入显色剂 B50μl ,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.

10.   终止:每孔加终止液 50μl ,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.   测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

 

计算和结果判定:

试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00;  阴性对照平均值≤0.20 临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定:样品OD <  临界值(CUT OFF)者为类嗜 T 淋巴细胞病毒(HTLV)阴性

阳性判定:样品OD ≥  临界值(CUT OFF)者为类嗜 T 淋巴细胞病毒(HTLV)阳性。

注意事项

1 .操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

2 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。

3 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

4 . 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5 .底物请避光保存。

6 .试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm

7 .所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须 注意安全。

保存条件及有效期

1 .试剂盒保存:;2-8℃。

2 .有效期:6 个月


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